Morpho-anatomical study of Stevia rebaudiana roots grown in vitro and in vivo

ABSTRACT Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni, Asteraceae, is used as a food additive because its leaves are a source of steviol glycosides. There are examples of tissue culture based on micropropagation and phytochemical production of S. rebaudiana leaves but there are few studies on adventitious root culture of S. rebaudiana. More than 90% of the plants used in industry are harvested indiscriminately. In order to overcome this situation, the development of methodologies that employ biotechnology, such as root culture, provides suitable alternatives for the sustainable use of plants. The aim of this study was to compare morpho-anatomical transverse sections of S. rebaudiana roots grown in vitro and in vivo. The in vitro system used to maintain root cultures consisted of a gyratory shaker under dark and light conditions and a roller bottle system. Transverse sections of S. rebaudiana roots grown in vitro were structurally and morphologically different when compared to the control plant; roots artificially maintained in culture media can have their development affected by the degree of media aeration, sugar concentration, and light. GC–MS and TLC confirmed that S. rebaudiana roots grown in vitro have the ability to produce metabolites, which can be similar to those produced by wild plants.

Método imunomagnético associado ao meio MesenCult® na obtenção de células mononucleares da medula óssea de coelhos negativas para o anticorpo monoclonal CD45 / Immunomagnetic method associated with MesenCult® medium to obtain bone marrow mononuclear cells from rabbits negative for CD45 monoclonal antibody

O objetivo detse artigo é de descrever um protocolo de isolamento das células mononucleares da medula óssea de coelhos, seguido de purificação celular por depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 e posterior expansão em meio de cultura MesenCult®. Dez coelhos machos adultos, da raça Nova Zelândia, com idade média de 1,0±0,2 anos e peso médio 3,5±0,24kg, foram utilizados para padronização da metodologia. O isolamento das células mononuclares da medula óssea foi realizado pelo gradiente de densidade Ficoll-paque® e a purificação e obtenção das células- pela depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 em base imunomagnética. A população celular obtida foi expandida posteriormente em meio de cultura MesenCult®. No isolamento pelo gradiente de icoll-Paque® foi obtido um rendimento médio de 7,31x106 células/mL. Após purificação e obtenção das possíveis células-tronco mesenquimais pela base imunomagnética, houve um decréscimo do rendimento para 2,28x106 células/mL, mas o processo de expansão foi incrementado pelo cultivo celular. Os resultados indicaram que as células obtidas da fração mononuclear da medula óssea, cultivadas in vitro foram capazes de gerar células aderentes 24 horas após o cultivo, com predominância de células fibroblastóides sugestivas de células-tronco mesenquimais. Concluiu-se que a obtenção de células-tronco mesenquimais pode ser alcançada após purificação das células mononucleares da medula óssea de coelhos pelo método imunomagético, o meio de cultura MesenCult® proporciona um ambiente adequado para a rápida expansão in vitro e o número de passagens exerce influência negativa sobre as características morfológicas das células.

The objective of this study was to describe guidelines for the isolation of bone marrow mononuclear cells from rabbits, followed by cell purification by negative depletion with CD45 monoclonal antibody, and further expansion in MesenCult® medium. Ten adult male New Zealand White rabbits, age average of 1.0±0.2 years and weighting 3.5±0.24kg, were used to obtain a standardized method. The mononuclear cells of the bone marrow were isolated with Ficoll-paque® density gradient centrifugation, and the cell purification and acquisition was completed by negative depletion with CD45 monoclonal antibody in immunomagnetic base. The cell population obtained was expanded in MesenCult® medium. Through isolation with Ficoll-paque® density gradient was possible to obtain an average yield of 7.31x106 cells/mL. After purification and acquisiton of potential mesenchymal stem cells by the immunomagnetic base, there was a yield decrease to 2.28x106 cells/mL; however the expansion process was increased in cell culture. The results indicated that cells obtained from the mononuclear fraction of bone marrow and cultivated in vitro were capable to generate adherent cells 24 hours after culture, with predominance of fibroblastoid cells suggestive of mesenchymal stem cells. It can be concluded that mesenchymal stem cells can be achieved with purified rabbit bone marrow mononuclear cells through the immunomagnetic method, as the MesenCult® medium provides a suitable environment for a quick in vitro expansion, and the number of passages exerts negative influence on the morphological characteristics.

Ambientes virtuais, escrita e clínica fonoaudiológica / Virtual environments, writing and clinical speech therapy

O uso da escrita em ambientes virtuais, sobretudo na Web, tem sido objeto de reflexão e de polêmica, pois afeta convenções e o uso tradicional da mesma. Na literatura fonoaudiológica informática e internet, geralmente, são utilizadas como subsídios terapêuticos modernos e eficazes. Entretanto, áreas afins já fazem uso do meio digital tanto para capacitação e aprimoramento profissional, como para mediação com o outro: aluno, paciente, familiares.O objetivo desta pesquisa exploratória, realizada por meio de revisão bibliográfica e vinhetas clínicas, é discutir a efetividade do emprego da escrita virtual como dispositivo terapêutico fonoaudiológico. Aspectos éticos da relação terapeuta-paciente e o uso de novas formas da linguagem escrita no dia-a-dia de nossos pacientes são alguns dos pontos que merecem a atenção, discussão e reflexão por parte dos fonoaudiólogos na clínica contemporânea.

The use of writing in virtual environments, particularly the Web, has been a subject of discussion and controversy, since it affects conventions and the its traditional use. In Speech therapy literature, computer science and the internet are generally used as modern and effective therapeutic assistance. However, similar areas are already making use of digital media for both training and professional improvement, and for mediation with others: students, patients, family members.The aim of this exploratory research, developed through bibliographic research and clinical memories, is to discuss the effectiveness of the use of writing in virtual environments as a speech therapeutic device. Ethical aspects of the therapist-patient relationship, the clinical demands of each case, and the proliferation of new forms of writing in our patients' everyday lives are just some of several aspects that deserve attention, discussion and reflection by Speech Therapy professionals in contemporary clinical practice

El uso de la escritura en ambientes virtuales, sobretodo en la Web, es objeto de discusión y controversia, porque afecta convenciones y su uso tradicional. En la literatura fonoaudiológica, informática y Internet son, generalmente utilizados como subsídios terapéuticos modernos e eficaces. Sin embargo, áreas afines ya se utilizan del medio digital tanto para la capacitación como para la mediación con el otro: alumno, paciente, familiares.El objetivo de esta investigación exploratoria desarrollada por médio de revisión bibliográfica y viñetas clínicas, es discutir la eficacia de la utilización de la escritura virtual como dispositivo terapéutico fonoaudiológico. Aspectos éticos de la relación terapeuta-paciente y el uso diário de formas del lenguaje escrito por nuestros pacientes, son algunos de los puntos que merecen la atención, discusión y reflexión por parte de los fonoaudiólogos en la clínica contemporánea.

Morfo-anatomia da plântula de tabernaemontana catharinensis A. DC. (Apocynaceae) / Morphology and anatomy of the seedling of tabernaemontana catharinensis A. DC. (Apocynaceae)

Tabernaemontana catharinensis, conocida vulgarmente como lechero, es una especie perteneciente a la familia Apocynaceae. El actual estudio se refierea la morfología y la anatomía de la plántula de esta especie. Las semillas colectadas desde varios arboles creciendo en la planicie de la inundación del alto río Paraná, fueron germinadas en una cámara de germinación con una temperatura constante de 300C y mantenidas bajo luz fluorescente continua. El desarrollo de las plántulas ocurrió en un invernadero. La anatomía fue estudiada en plántulas fijadas en FAA 50. Este material fue seccionado transversalmente y las secciones obtenidas fueron teñidas en safranina y azul de astra. La plántula es fanerocotiledonar y epígea y presenta raíz axial, cuello, cotiledones ovados, epicótilo reducido, y eófilos lanceolados semejantes a los metáfilos. Su raíz es tetrarca. El hipocótilo y epicótilo tienen estructura caulinar y presentan crecimiento secundario cuya peridermis es de origen del felógeno en el ámbito epidérmico. Los cotiledones y eófilos son hojas dorsiventrales, con un estrato de parénquima en empalizada y algunas capas de parénquima esponjoso. Los cotiledones tienen un haz vascular colateral en la vena media, mientras en los eófilos el haz es bicolateral.

Tabernaemontana catharinensis is a species belonging to the family Apocynaceae. In this paper, the seedling morphology and anatomy of this species are described and discussed. The seedling development was analyzed until the first eophyll pair’s formation. The seeds were collected from several trees, in fragments of the semideciduous seasonal alluvial and submontaneforest located on the Upper Paraná River floodplain. The seeds were germinated at constant temperatures of 300C, using germination chambers and maintained under continuous fluorescent light. Seedlings development occurred in the greenhouse. The seedlings fixed in FAA 50 were sectioned by microtome and stained with safranin and astra blue. Seedling is phanerocotylar and epigeal with axial root, collet, ovate cotyledons, reduced epicotyl, and lanceolate eophylls similar to the metaphylls. Root is tetrarch. Hypocotyl and epicotyl have stem structure, and they present secondary growth with phellogen of epidermic origin. Cotyledons and eophylls are dorsiventral leaves, with uniseriate palisade parenchyma and some layers of spongy parenchyma. Cotyledons have a collateral vascular bundle in the midrib, while in the eophylls is bicollateral one.

Anatomy of the developing fruit of Metrodorea nigra a. st.-hil. (rutaceae)

El pericarpio y la semilla en desarrollo de Metrodorea nigra fueron examinados estructuralmente. Flores y frutos enetapas diferentes de maduración se fijaron en FAA 50 y se seccionaron transversal y longitudinalmente, según técnicas usuales en estudios anatómicos. El epicarpio diferenciado está representado por la peridermis de origen subepidérmico. El mesocarpio es parenquimatoso. El endocarpio es esclerenquimatoso y se origina de la acción meristemática de la epidermis del ovario. La semilla es endotestal y se origina del óvulo anátropo, crasinucelado y con dos tegumentos. La nucela y endospermo aparecen en pequeña cantidad en la semilla madura. El embrión es recto y posee cotiledones de reserva. La semilla y el endocarpio son eyectados en el proceso autócoro que ocurre en la especie. El fruto es capsular, tipo coccarium.

Pericarp and seed in development of Metrodorea nigra are investigated structurally. Flowers and fruits in different stages of maturation were fixed in FAA 50 and cross- and longitudinally sectioned, according to usual techniques. The differentiated epicarp is represented by the periderm of subepidermal origin. The mesocarp is parenchymatous. The endocarp is sclerenchymatous and originates from the meristematic action of the inner epidermis of the ovary. The seed is endotestal and originates from an anatropous, bitegmic and crassinucellate ovule. The nucellus and the endosperm occur in small quantity in the mature seed. The embryo is straight with thick cotyledons. The seed and the endocarp are ejected in the autochory process. The fruit is capsular and coccarium(.

Morphology and anatomy of the flower and anthesis of Metrodorea nigra St. Hill.(Rutaceae)

Metrodorea nigra St. Hill. (Rutaceae) apresenta flores perfeitas que ocorrem em panícula. O pico de florescimento acontece em agosto e setembro. A antese é diurna e a espécie apresenta flores protândricas. As sépalas verdes e as pétalas vermelhas apresentam epiderme papilosa contendo estômatos e mesofilo parenquimático. A antera tetrasporangiada também apresenta uma epiderme papilosa, células do endotécio com espessamento parietal secundário, duas camadas médias e tapetum binucleado. O único pistilo apresenta a parede do ovário com tecido nectarífero e uma epiderme ventral meristemática, um estilete sólido e um estigma imperceptível. Os óvulos são anátropos, bitegumentados e crassinucelados e apresentam um obturator de origem funicular e placentária. O nectário, em forma de disco, circunda a base do ovário e em seu ápice há várias protuberâncias pilosas.

Tabebuia avellanedae Lor. ex Griseb. (Bignoniaceae) submitted at the flooding and the "Ethrel" and silver nitrate application

Three-month-old Tabebuia avellanedae Lor. ex Griseb. (Bignoniaceae) plants cultivated in the greenhouse were submitted to 56 days of flooding and to "Ethrel" and silver nitrate applications to find out itÆs capacity for morphological and physiological modifications to survive under flooding conditions and at which degree such responses were correlated with alterations in the ethylene level. Flooding and the "Ethrel" application caused growth reduction and epinasty in T. avellanedae and the application of silver nitrate lessened some these symptoms. Certain symptoms shown during flooding by this species and its ability to develop structures which lessen hypoxia effects, such as stem fissures and hypertrophied lenticels in the roots, modifications which enable the species to adapt to short flooding periods, could be related to increases in the ethylene concentration in the plant tissues

Morfo-anatomia e aspectos da biologia floral de Cabraela canjerana (Vell.) Mart. (Meliaceae) / Morphology, anatomy and floral biology of Cabrraela canjerana (Vell.) Mart. (Meliaceae)

Cabralea canjerana (Vell.) Mart. is a tree that occurs frequently in secondary forests of Maringá, Paraná, Brazil and presents a valuable wood. Its flowering time occurs from August to October and the anthesis occurs during the night. Its flowers are visited by Lepidoptera-Noctuidae. The flowers are unisexual and solitary or arranged in panicles. The perianth presents a papillose epidermis with striate cuticle and a parenchymatic mesophyll. Ten stamens constitute the androecium and are arranged in a staminal tube with anthers. The anthers present epidermis, endothecium, two median layers and secretory tapetum with binucleate cells. The semi- nferior ovary presents anatropous, bitegmic and crassinucelate ovules. The nectaries are located in the base of the ovary and staminal tube and they present papillose epidermis with stomata and secretory parenchyma with a conspicuous phloematic tissue. Key Words: Cabraleacanjerana, flower, anthesis, morphology, anatomy.

Cabralea canjerana (Vell) Mart. es una especie arbórea de madera valiosa que crece en matorrales secundarios de Maringá, Estado del Paraná, Brasil, de alli fueron recoled flores y capullos para el presente estudio. Florece desde agosto hasta octubre y presenta antesis nocturna. Sus flores son visitadas por lepidópteros de la familia Noctuidae. Las flores se disponen en panículas o son solitarias y son diclinas. El perianto tiene epidermis con cutfcula estriada y papilosa y mesófilo parenquimático. Los estambres en número de 10 forman un tubo estaminal, cuyas anteras son caracterizadas mortológicamente y luego anatómicamente, cuya pared está constituida por epidermis, endotecio, dos capas medias y tapete secretor binucleado. El ovario es semi-infero y presenta óvulos anátropos con dos tegumentos y crasinucelados. Los nectarios ocurren en la base del ovario y tubo estaminal y tienen epidermis con pelos, estomas y parénquima secretor con tejido floemático predominante

Morfo-anatomia do desenvolvimento do antocarpo e do fruto de Pisonia aculeata L. (Nyctaginaceae) / Morphology and anatomy of the development of the anthocarp and fruit of Pisonia aculeata L. (Nyctaginaceae)

Pisonia aculeata L. es un arbusto sarmentoso que presenta amplia distribución en los bosques tropicales y subtropicales del sur del Brasil. El estudio del desarrollo morfo-anatómico de sus antocarpos y de sus frutos es objeto del presente trabajo. Las flores en pre y postantesis y los frutos en diversas fases de diferenciación fueron recolectados en el Horto Florestal de Maringá, Paraná, Brasil y analizados morfológica y anatómicamente. El antocarpo tiene orígen en el perigonio y se caracteriza por presentar la epidermis uniseriada de la cara abaxial, donde se destacan emergencias glandulares, mesofilo parenquimático con gran número de estratos celulares, gracias a la acción del meristema ventral formado aún en la fase de perigonio, y la epidermis de la cara adaxial glabra. El pericarpio se desarrolla a partir de la pared del ovario que contiene un óvulo anátropo, bitegumentado y crasinucelado. En la semilla madura se presenta la testa delgada, perisperma, y endosperma de origen nuclear, no formándose tegmen. El antocarpo, además de la protección del fruto y semilla, presenta gran importancia en el proceso de dispersión de esta especie (epizoocoria). La estructura del fruto permitió demostrar que es correcta su clasificación como aquenio y no cariopsis como lo registrado en la literatura.

Pisonia aculeata L. is a widespread species that occurs frequently in tropical and subtropical forests in the South of Brazil. This paper presents a morphological and anatomical study of the development of its anthocarps and the fruits. Flowers in pre and post anthesis and fruits in different stages of development were collected in the Horto Florestal of Maringá, Paraná State, Brazil. The anthocarp originates in the perigone and it can be characterized by the presence of an uniseriate epidermis on the abaxial surface, presence of glandular emergences, a glabrous epidermis on the adaxial surface and a parenchymatous mesophyll. This last tissue presents a great number of cellular strata due to the action of a ventral meristema installed still in the perigone phase. The pericarp develops from the wall of the ovary. The ovule is anatropous, bitegmic and crassinucellate. The mature seed presents a thin testa with thickened cell walls just in the rafe region, perisperm and endosperm with nuclear origin, without development of tegmen. The anthocarp has great importance in the process of dispersion of this species (epizoochory). This study confirms that the fruit is an achene and not a caryopsis as affirmed in the literature.

Surtos de botulismo em bovinos no Brasil associados à ingestäo de água contaminada / Botulism outbreaks in cattle in Brazil associated with contamined water

Botulismo em bovinos resulta da ingestäo de toxina previamente formada. No presente trabalho säo descritos sete surtos da intoxicaçäo onde os dados clínico-patológicos, epidemiológicos e os achados laboratoriais indicaram a possível ingestäo da toxina através da água contaminada. O coeficiente médio de mortalidade foi de 20,1 por cento, com letalidade de 99,92 por cento, e morbidade de 31,62 por cento. Dos cerca de 9.000 bovinos envolvidos nos surtos, 2.844 morreram com quadro clínico predominantemente superagudo e agudo. A alta morbidade e mortalidade foram registradas num curto período de tempo e envolveram todas as categorias animais, com quadro clínico-patológico caracterizado por paresia e paralisia da musculatura da locomoçäo, deglutiçäo e mastigaçäo e ausência de lesöes macroscópicas. As circunstâncias em que ocorreram os surtos estiveram relacionadas com a existência de carcaças de animais decompostas ou matéria orgânica vegetal na água de dessedentaçäo. Foram detectadas toxinas botulínicas C e/ou D nas coleçöes de água, nas vísceras e no soro sangüíneo de parte considerável dos materiais examinados

Teleangiectasia parafoveal: apresentaçäo de dois casos / Parafoveal telangectasis: report of two cases

Os autores apresentam o quadro clínico de dois casos de teleangiectasia parafoveolar, entidade de conhecimento recente ainda näo descrita em literatura de Língua Portuguesa. Säo apresentados os achados angiográficos e comentários quanto a possíveis diagnósticos diferenciais